杆状病毒介导肝生长因子在兔骨髓间充质干细胞中的调控表达

摘要

目的:建立转染高效可调控的携带肝生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)为目的基因的重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并探寻其在转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)后的最佳诱导浓度。方法:用转基因的方法构建重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,随后转染BM-MSCs,用ELISA和Western blot检测不同浓度强力霉素(doxycycline,DOX)诱导体外培养兔BM-MSCs分泌的HGF浓度。结果:构建了高效可调控重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并且成功转染兔BM-MSCs,用系列浓度DOX诱导时ELISA和Western blot均检测到BM-MSCs中HGF的表达有DOX诱导剂量依赖关系并且连续7 d持续表达,且实验组的HGF的表达量明显高于对照组(P<0.001)。结论:成功构建一次性转染、高效可调控的重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并实现对HGF表达的调控,当DOX诱导浓度为1μg/ml时为其体外最佳诱导浓度。