大孔树脂吸附法高通量快速提取微生物次生代谢产物

摘要

为建立一种适合药物高通量筛选的快速提取微生物代谢产物中小分子化合物的方法,采用弱极性AB-8和中等极性ADS-17大孔吸附树脂从细菌发酵液吸附小分子代谢产物,并用50%乙醇溶液将吸附的小分子化合物洗脱下来,干燥后用二甲基亚砜溶解备用;应用流感病毒神经氨酸酶作为抗流感病毒药物筛选的靶标,MUNANA作为底物,测定发酵液中活性物质对神经氨酸酶的抑制活性。优化了神经氨酸酶抑制试验条件,底物500倍稀释、病毒用量1μLp、H 6.0为最佳反应条件。证实了大孔吸附树脂吸附法纯化的微生物发酵液中小分子化合物粗提物具有不同程度的流感病毒神经氨酸酶抑制活性。与直接使用发酵液及用有机溶剂乙酸乙酯提取法比较,用大孔吸附树脂吸附法制备的细菌代谢产物的抗流感病毒神经氨酸酶活性明显好于直接使用发酵液。该方法与乙酸乙酯提取法效果相当,但制备更简便,能实现高通量筛选。