趋化因子受体CCR5反义RNA重组腺病毒载体的构建

摘要

目的　构建趋化因子受体CCR5反义核糖核酸 (RNA)重组载体并获取重组腺病毒 ,用于抗艾滋病病毒 1型 (HIV 1)基因治疗研究。方法　用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)法 ,从健康人外周血单核细胞中扩增出趋化因子受体CCR5 5′端翻译起始区 6 36bp的互补脱氧核糖核酸 (cDNA)片段 ,将其克隆至Bluescript载体测序鉴定并确定方向之后 ,反向插入腺病毒载体穿梭载体pAdTrack 巨细胞病毒 (CMV)中 ,再与骨架质粒 pAdEasy 1共转染BJ5 183细菌同源重组 ,卡那霉素抗性培养基筛选阳性克隆 ;同源重组的载体用脂质体转染剂转染 2 93细胞 ,在荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白 (GFP) ,获取的重组腺病毒用PCR法鉴定、氯化铯密度梯度离心法纯化。结果　成功构建了CCR5反义RNA重组腺病毒载体 ,并于 2 93细胞中包装、扩增得到高滴度的重组腺病毒 ,其滴度为 5× 10 11PFU/ml。结论　成功地构建了携带CCR5反义RNA重组腺病毒载体 ,为研究其抗HIV 1的作用打下基础。