化学合成siRNA体外对柯萨奇B_3病毒的影响

摘要

目的　RNA干扰是近年来研究基因功能的重要工具。本研究是在培养HELA细胞中 ,体外化学合成siRNA (smallinterferingRNA)对柯萨奇B3病毒 (CoxsackievirusB3,CVB3)的影响 ,探讨RNA干扰的抗病毒效应与其应用前景。方法　根据siRNA靶序列设计原则 ,设计了一段针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA ,并在体外通过化学合成形成siRNA。同时合成一段与CVB基因组序列无关的阴性对照siRNA。用CVB3感染培养HELA细胞 ,将其分为 3组 ,即siRNA组 (n =8) ,阴性siRNA组(n =8) ,病毒对照组 (n =8) ,分别观察转染后第 1天到第 5天的细胞病变 ,并与未感染CVB3的空白对照组进行比较 ;采用RT PCR技术检测感染CVB3各组的病毒RNA片断 ,观察病毒RNA与内参GAPDH的OD比值 ;用免疫荧光技术检测各组CVB3蛋白的表达。结果　RT PCR检测各组CVB3病毒5 端非编码区 (5 UTR)RNA ,siRNA组与阴性siRNA组和病毒对照组比较无明显变化 (p >0 0 5 ) ;免疫荧光检测各组CVB3病毒蛋白也未见显著差异 ;细胞病理效应 (cytophaticeffects,CPE)各组间未见明显差异。结论　本文选择针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA未能抑制CVB3病毒复制。