XL-90等美洲黑杨杂交子代ISSR分子鉴别

摘要

为了探讨ISSR分子标记在美洲黑杨杂交子代分子鉴别和分子标记辅助育种中的应用,笔者以15个黑杨无性系为研究对象,进行ISSR分子标记研究。(1)经单因素对比实验,建立适合黑杨无性系的ISSR-PCR分子反应体系,即在25μL反应体系中加入引物1.0μmol/L,模板30ng,Taq酶1.5U,dNTP0.25mmol/L,Mg2+2.0mmol/L。反应程序为94℃加热3min,使模板DNA变性,然后进入下列温度循环:94℃变性45s、56℃退火30s、72℃延伸1min,共计35个循环。循环结束后在72℃延伸5min,以保证DNA延伸彻底。(2)筛选出10个ISSR引物对15个黑杨无性系进行ISSR分析。共检测到63个位点,各无性系的多态位点百分率在20.63%～30.16%之间。多态位点百分率最高的为XL-77、XL-83、XL-101、2KEN8和I-69;多态位点百分率最低的为XL-92、XL-90。(3)通过各无性系的Nei遗传距离与UPGMA聚类分析,除欧美杨A65/31外,其他所有美洲黑杨无性系聚为1个类群3个亚群,美洲黑杨杂交子代间遗传分化及亲缘关系通过ISSR-PCR特异性标记谱带可以得到准确鉴别。