从50 mL外周血中高效扩增CIK方法的探讨

摘要

目的寻求有效方法使得一次性采血50mL制备的细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine inducedkiller,CIK)足以满足临床过继性细胞免疫治疗需要。方法从50mL外周血中分离外周血单个核细胞(peripheralbloodmononu clearcell,PBMC)后,分别应用A、B方法进行培养。A培养法应用γ干扰素(interferonγ,IFNγ)、CD3单克隆抗体(CD3monoclonalantibody,CD3mAb)、白细胞介素2(inter leukin2,IL2)和植物血球凝集素(phytohemagglutinin,PHA)行常规培养;B培养法在A培养法的基础上于培养的第2天,另外加入终浓度为10ng/mL的IL4,1000U/mL的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocytemacrophage colonystimulatingfactor,GM CSF)。比较A、B培养方式下CIK的增殖速度、培养前后免疫表型变化和细胞周期分布情况及对白血病细胞株K562和肝癌细胞株SMMC7721的杀伤活性。结果培养2周发现,B培养法可使CIK增殖倍数明显提高,最高可达840倍,与A培养法比较,差异有统计学意义,P0.05。结论在CIK培养的第2天,加入CD3mAb、IL2和PHA的基础上再加入IL4和GM CSF可使CIK得率更高,细胞总数>5×109。