脐血间充质干细胞体外培养方法的改良及其生物学特性研究

摘要

目的：对体外分离培养脐血间充质干细胞（UCB-MSCs）的传统方法进行改进，以提高培养成功率，同时观察其生物学特性。方珐：无菌条件下取28份足月产新生儿脐血，以密度梯度离心法分离其中的单个核细胞，以含10％FBS的α-MEM培养基进行体外培养。原代培养5～7d后半量换液，后每隔3～4d全量换液1次。细胞贴壁之后按改良方法进行培养：方法一，当皿底圆形巨核细胞融合、梭形成纤维样细胞脱落时将细胞悬液移入新的皿中培养；方法二，待皿底圆形巨核细胞渐渐占取优势时，将培养基换为含15％FBS的α-MEM，当圆形巨核细胞大部脱落后换回含10％FBS的α-MEM培养基。显微镜下观察UCB-MSCs的形态，流式细胞仪测定细胞免疫表型，体外成骨及成脂诱导并进行细胞化学染色。结果：28份脐血中20份培养出贴壁细胞，其中13份培养出能融合且可稳定传代的成纤维样细胞，成功率为46．4％，可传至22代而无形态上的变化，而且强烈表达CD105、CD29等MSCs表面标志，而CD34、CD45和CDl06等表达呈阴性。在特定条件下，UCB-MSCs可分化为成骨细胞和脂肪细胞。结论：脐血中存在MSCs，培养方法经改良后可提高UCB-MSCs的培养成功率。UCB-MSCs具有与其他来源的MSCs类似的表型及分化潜能，且易于体外扩增、传代稳定，可望在骨组织工程学研究中有广阔的应用前景。