纤维粘连蛋白与流体剪切力对体外培养的牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

摘要

目的:在体外利用流体剪切力模拟咬合创伤,对牙周膜成纤维细胞(HPDLF)给予不同浓度的纤维粘连蛋白(FN)处理,在不同时段测量HPDLF的COX-2mRNA的表达量,以期模拟HPDLF在口腔存在咬合创伤的情况下FN对其生物学行为的影响。方法:收集因正畸矫治需要拔除的健康年轻恒牙,以第3代细胞作为研究对象。样本分为A、B2组,A组为利用水平摇床施加剪切力培养,转速为35r/min;B组为静态培养。A、B2组中分别分为加入FN0μg/ml(对照)、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml等4组,每组4孔。无血清培养6h、12h。采用SPSS13.0软件包对结果进行配对t检验。结果:HPDLF原代培养,24h后80%组织块贴壁。7～10d有细胞从组织块周围游出。14d左右长满培养瓶。免疫组化染色显示抗波丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性。RT-PCR结果显示,A组6h后COX-2表达即有体现;12h后,相同FN用量的样本的COX-2表达量较加力6h时高,且表达量随着FN用量的增加而减少。B组中,各样本电泳结果为阴性。光密度扫描分析,配对t检验结果t=13.45,P<0.01。结论:流体剪切力可以引起HPDLF的炎性反应。人血浆FN可以减少HPDLF的COX-2mRNA表达,呈时间、剂量依赖性。