重组蛇毒纤溶因子特异性相关突变体的构建、表达和纯化

摘要

目的通过重组蛇毒纤溶因子特异性相关突变体的构建、表达和纯化,初步考查其特异性变化。方法SOEingPCR方法构建突变体,突变体在P.pastoris酵母中诱导表达。表达蛋白经过柱纯化,纯化蛋白用SDS-PAGE和Westernblot鉴定,并用MALDI-TOF初步分析其作用于氧化胰岛素B链的特异性。结果SDS-PAGE和Westerenblot证实得到纯化的突变体。MALDI-TOF质谱分析揭示,rFⅡ及突变体对氧化胰岛素B链的早期裂解都发生在第12～13位点,但次级的裂解模式有所不同。结论删除的序列可能与rFⅡ的特异性相关。