单克隆接种/成像设备VIPS在CHO工程细胞株单克隆筛选中的应用

摘要

目的探讨应用单克隆接种/成像设备VIPS(Verified In-situ Plate Seeding)建立CHO工程细胞株单克隆筛选的方法。方法采用VIPS将稳定转染目的基因的细胞池Cell pool 1分别于含不同组合(共18种组合,编号1~18)及体积(100和200μL/孔)培养基的96孔板中进行单细胞接种,并进行单克隆源性追踪拍照,根据图像结果,计算单克隆接种率、克隆形成率、单克隆增殖速率,评价单克隆源性图像效果。通过稳定转染目的基因的细胞池Cell pool 2、Cell pool 3、Cell pool 4验证该方法的适用性。结果最适单克隆培养基为MediumⅡ,培养基体积为100μL/孔。最佳工艺条件下,Cell pool 1的单克隆接种率为80%,克隆形成率为83%,增殖速率较快,单克隆源性图像清晰。Cell pool 2、Cell pool 3、Cell pool 4在最佳工艺条件下,单克隆接种率均值为78%,克隆形成率均值为67%,增殖速率略有差异,细胞分裂过程图像均清晰。结论采用VIPS建立的CHO工程细胞株单克隆筛选方法可提高CHO工程细胞株的克隆形成率,且能够提供充分的单克隆源性证明。