肾素前体和成熟肾素的原核表达及纯化

摘要

目的原核表达及纯化肾素前体(renin,REN)和成熟肾素(REN-340),并检测其浓度。方法根据NCBI中检索获得的人REN基因序列(5972),经E.coli密码子优化后,人工合成REN及REN-340基因片段,克隆至载体p ET-28a(+),构建重组表达质粒6×His-REN-p ET和6×His-REN-340-p ET。转化至感受态E.coli BL21(DE3),于不同诱导温度(20、25、30、37℃)及不同终浓度(0.1、0.2、0.4、0.5 mmol/L)IPTG条件下进行诱导表达。采用最佳诱导条件诱导表达重组REN和REN-340,经Ni-NTA镍离子亲和层析后,ELISA法检测其浓度。结果经双酶切及测序鉴定,重组表达质粒6×His-REN-p ET和6×His-REN-340-p ET构建正确。重组REN和REN-340的最佳诱导温度分别为37和20℃,最佳IPTG终浓度分别为0.1和0.2 mmol/L。纯化的重组REN和RNE-340浓度分别为9148.21和15115.31 m IU/m L。结论制备的重组REN和REN-340蛋白浓度较高,且生产周期较短,有望用于制备室间质量评价(external quality assessment,EQA)的候选质控品和标准物质。