花生AhLrK10的基因克隆、表达载体构建及表达分析

摘要

铝毒害严重影响着花生的生长发育和产量。为了探究花生类受体蛋白激酶对铝胁迫的响应及调控,本研究基于对已有转录组数据的分析,克隆得到一个铝胁迫响应类受体蛋白激酶基因AhLrK10。序列分析发现AhLrK10全长1716 bp,编码571个氨基酸。AhLrK10蛋白含有信号肽、跨膜域、保守的丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸蛋白激酶结构域,相对分子量为64.5 kD,理论等电点为7.87,二级结构主要以无规则卷曲和α-螺旋为主。系统进化分析表明花生AhLrK10与红豆ApLrK10具有较近的亲缘关系。通过同源重组技术将AhLrK10全长克隆到pCAMBIA1301载体上,并转化至农杆菌GV3101。运用RT-qPCR,分析了AhLrK10在不同组织及不同铝胁迫时间下的表达。组织特异性表达分析表明,在‘ZH2’中,AhLrK10表达无组织特异性,在‘99-1507’中,AhLrK10在幼果的表达量最高。铝胁迫表达分析发现,在‘ZH2’中,AhLrK10受铝胁迫诱导显著上调表达,在‘99-1507’中,AhLrK10受铝胁迫表达无显著差异。本研究为铝胁迫条件下RLKs功能的深层挖掘提供理论基础。