独脚金SRAP-PCR反应体系的优化及引物筛选

摘要

为建立适用于独脚金的SRAP-PCR反应体系并筛选扩增条带丰富的引物组合,本研究以独脚金基因组DNA为模板,采用单因素分析法对影响SRAP-PCR反应的5个主要因素dNTP浓度、Taq酶浓度、Mg^(2+)浓度、引物浓度、DNA浓度进行优化;并利用优化的反应体系对引物进行筛选。结果表明,独脚金SRAP-PCR最优反应体系为10μL,其中dNTP 0.06 mmol/L,Taq酶0.3 U,Mg^(2+)2.0 mmol/L,引物1.0μmol/L,DNA 25 ng,10×PCR Buffer 1μL;利用该体系从95对引物中共筛选出扩增条带清晰、稳定、丰富引物组合39对。本研究所优化的反应体系和筛选的引物组合为后续独脚金种质资源遗传多样性研究奠定有力基础。