沉默PGGT1B对唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的:探讨GGTase-I在唾液腺腺样囊性癌SACC-LM和SACC-83细胞增殖和凋亡方面的作用及其相关机制。方法:根据编码GGTase-I的PGGT1B基因序列,应用慢病毒介导的基因沉默技术,稳定敲低SACC-LM和SACC-83细胞中PGGT1B基因的表达。将细胞分为实验组(沉默目的 基因PGGT1B的细胞)、阴性对照组(未沉默目的基因PGGT1B的细胞)和空白对照组(只包含空载体的细胞)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞PGGT1B和RhoA的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GGTase-I、RhoA、RhoA膜蛋白、CyclinD1及p21的蛋白表达;采用CCK-8实验分析细胞的增殖行为;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡能力变化;通过裸鼠皮下成瘤实验观察PGGT1B编码的GGTase-I蛋白对SACC细胞成瘤能力的影响。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果:qRT-PCR检测结果显示,慢病毒感染SACC-LM和SACC-83细胞后,PGGT1B和RhoA的相对表达量降低(P0.05),GGTase-I、RhoA膜蛋白的相对表达量下降(P<0.05),CyclinD1的相对表达量降低,p21的相对表达量增高(P<0.05);SACC-LM和SACC-83细胞增殖活性下降、凋亡能力增加(P<0.05);裸鼠皮下肿瘤体积、质量下降,生长速度减慢。结论:通过沉默编码GGTase-I蛋白的PGGT1B基因,可降低RhoA蛋白活性,促进细胞凋亡、抑制细胞增殖,表明GGTase-I蛋白可对SACC-LM和SACC-83细胞的增殖行为和凋亡能力产生影响,有望成为SACC基因治疗的新靶点。