假单胞菌(Pseudomonas sp.)AT39突变体库的构建及反式茴脑利用相关基因(tao)的克隆

摘要

生物转化反式茴脑生成的苯丙素类芳香物质被视为天然原料,能广泛应用于食品加工、香料生产及医药等领域。以能代谢反式茴脑的假单胞菌(Pseudomonas sp.)AT39为出发菌株,采用转座子(pTnMod-RKm’)插入突变构建了含有6137个突变体的突变体库,筛选出44株反式茴脑代谢受影响的突变株。检测突变菌及野生菌的反式茴脑利用能力,发现突变菌AT39-15的反式茴脑代谢能力是野生菌的14%。利用hiTAIL-PCR技术对突变菌AT39-15转座子侧翼序列扩增,获得插入突变的基因,测序结果显示基因大小为1047 bp,基因序列与恶臭假单胞菌(Pseudomonas sp.)JYR-1的反式茴脑氧化酶基因(tao)一致性达100%。研究结果为下一步构建基因工程菌提供了基因资源。