茯苓多糖调控Rho-ROCK信号通路对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响和机制研究

摘要

探讨茯苓多糖对心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury, MI/RI）大鼠心肌细胞凋亡的影响及可能机制。将SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组（生理盐水）、模型组（生理盐水）、茯苓多糖低(100 mg·kg-1)剂量组、茯苓多糖高(200 mg·kg-1)剂量组和法舒地尔组(10 mg·kg-1),每组16只。除假手术组外，其他4组均通过结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h以构建MI/RI模型。TTC染色检测心肌梗死面积；HE染色观察心肌组织形态学变化；TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况；ELISA检测血清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）、肌酸激酶MB（creatine kinase MB,CK-MB）和白细胞介素（interleukin, IL）-1β、IL-18水平以及心肌组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活性和丙二醛（malon-dialdehyde, MDA）水平；Western blot检测大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein, Bax）、裂解半胱氨酸蛋白酶-3（cleavage cysteine protease-3,cleaved caspase-3）、Ras同源基因家族成员A（Ras homolog gene A,RhoA）、肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（myosin phosphatase target subunit 1,MYPT-1）及磷酸化MYPT-1（p-MYPT-1）、Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶1（Rho-associated coiled-coil forming kinase 1,ROCK1）表达水平。结果显示，模型组大鼠心肌组织局灶性坏死，心肌细胞肿胀，边界不清并伴有中性粒细胞浸润，茯苓多糖低、高剂量组和法舒地尔组大鼠上述病理变化有所减轻。与模型组比较，茯苓多糖低、高剂量组和法舒地尔组大鼠心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率明显降低。与假手术组比较，模型组大鼠血清LDH、CK-MB、IL-1β及IL-18水平和心肌组织中MDA水平显著升高，Bax、cleaved caspase-3、RhoA、ROCK1及p-MYPT-1蛋白相对表达水平显著升高，心肌组织中SOD水平、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低；与模型组比较，茯苓多糖给药组和法舒地尔组大鼠血清LDH、CK-MB、IL-1β及IL-18水平和心肌组织中MDA水平显著降低，Bax、cleaved caspase-3、RhoA、ROCK1及p-MYPT-1蛋白相对表达水平显著降低，心肌组织中SOD水平、Bcl-2蛋白相对表达水平显著升高。茯苓多糖对MI/RI大鼠心肌组织病理损伤、心肌细胞凋亡具有一定预防作用，这可能与抑制Rho-ROCK信号通路激活进而降低机体氧化和炎症反应有关。