结膜吸吮线虫MIF蛋白原核表达及生物学效应鉴定

摘要

目的 克隆、表达结膜吸吮线虫巨噬细胞迁移抑制因子（macrophage migration inhibitory factor, MIF）,纯化重组Tcp-MIF蛋白，并验证其生物学效应。方法 将筛选的MIF基因片段构建到pET-SUMO原核表达载体上，转化大肠杆菌BL21（DE3）;异丙基硫代半乳糖苷（isopropyl thiogalactoside, IPTG）诱导表达；利用HisLink亲和层析柱进行蛋白纯化及质谱鉴定；将纯化的Tcp-MIF蛋白作用于THP-1巨噬细胞，运用CCK8、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）、免疫印迹法（Western blotting, WB）检测MIF蛋白生物学效应。结果 成功构建pET-SUMO-MIF重组原核表达质粒，Tcp-MIF重组蛋白主要以可溶形式表达，相对分子质量约为26.80 KD。纯化Tcp-MIF蛋白能够促进THP-1巨噬细胞的增殖，减少促炎因子（TNF-α）,增加抑炎因子（IL-10）的产生；可通过与THP-1巨噬细胞表面TLR4受体结合，激活NF-κB通路。结论 利用重组结膜吸吮线虫MIF蛋白初步证实了Tcp-MIF蛋白具有调控宿主免疫系统的作用，为进一步探讨MIF蛋白在寄生虫与宿主的相互作用研究奠定了基础。