基于Wnt/β-catenin通路探讨尪痹片促进去势后胶原诱导性关节炎大鼠骨形成的机制

摘要

目的基于果蝇无翅基因/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路,研究尪痹片(WBT)干预去势后胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的骨形成机制。方法48只雌性SD大鼠经随机数字表法分为空白对照组、去势组、CIA组、去势CIA组、去势+WBT组、CIA+WBT组、CIA+甲氨蝶呤(MTX)组、去势CIA+WBT组,每组6只。去势法制备肾虚证模型,CIA法制备类风湿关节炎模型,WBT采用每日0.63 g/kg灌胃,MTX采用每周1.05 mg/kg结合生理盐水灌胃,其余组均予生理盐水灌胃,56日后取材。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)水平,蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测Wnt3a、Wnt10b、β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、Dickkopf相关蛋白-1(DKK-1)、Runt相关转录核心因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、核酸内切酶Dicer蛋白表达量,逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DKK-1、微小RNA(miR)-335-5p mRNA表达量。结果去势后大鼠逐渐出现弓背蜷缩、小便色淡、体温下降、毛发枯槁、垂尾等症状,CIA造模后出现关节肿胀变形、活动受限。与空白对照组比较,去势组Runx2表达降低,CIA组DKK-1、cAMP、cGMP表达增加,去势CIA组GSK-3β、Runx2、ALP表达降低,DKK-1、cAMP、cGMP表达增加,去势CIA+WBT组miR-335-5p表达上调(P<0.05)。与去势组比较,去势+WBT组cAMP、cGMP、cAMP/cGMP、Wnt3a、Runx2、ALP、Dicer蛋白表达升高(P<0.05)。与CIA组比较,CIA+WBT组Runx2表达上调(P<0.05)。与去势CIA组比较,去势CIA+WBT组的Wnt3a、Wnt10b、β-catenin、GSK-3β、Runx2、ALP表达均上调,DKK-1降低(P<0.05)。结论尪痹片可以抑制DKK-1表达、激活Wnt/β-catenin通路、提高miR-335-5p水平,促进去势CIA大鼠的骨形成。