不同浓度牡蛎蛋白肽对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和分化能力的影响

摘要

目的:探讨不同浓度牡蛎蛋白肽对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响。方法:选择具备稳定传代能力的第3代大鼠BMSCs,采用MTT试剂盒,检测细胞在0、10、20、50 mg/L不同牡蛎蛋白肽浓度干预培养24 h、3 d、7 d后的细胞活力。然后将BMSCs分为普通培养基组(DMEM)和成骨诱导培养基组(ODM),根据牡蛎蛋白肽的不同浓度,将实验组分为4组,依次为0、10、20、50 mg/L,利用碱性磷酸酶(ALP)染色法和ALP半定量检测法,研究不同浓度牡蛎蛋白肽对BMSCs培养10 d早期成骨分化的影响。应用茜素红染色法,半定量检测不同浓度牡蛎蛋白肽对BMSCs培养21 d后成骨矿化的影响,应用RT-PCR检测成骨相关基因的表达情况。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:MTT结果表明,经不同浓度药物干预处理后,细胞活力旺盛,无明显异常;但牡蛎蛋白肽药物浓度为50 mg/L时,细胞死亡数有上升趋势。ALP半定量检测结果显示,DMEM和ODM组诱导分化第10天时,20 mg/L浓度组的ALP活性显著高于对照组(P<0.05),50 mg/L浓度组的ALP活性与对照组无显著差异。茜素红半定量检测结果显示,ODM组中20 mg/L实验组的A值显著高于对照组(P<0.05)。与对照组及50 mg/L组相比,10、20 mg/L组RUNX-2和OCN的表达显著上升(P<0.05)。结论:高于50 mg/L浓度的牡蛎蛋白肽对BMSCs的成骨分化表现出明显抑制作用,而低浓度牡蛎蛋白肽,尤其是20 mg/L的牡蛎蛋白肽对BMSCs成骨分化及细胞生长有促进作用。