甲状腺乳头状癌细胞中长链非编码RNA FoxP4-AS1的表达及其生物学功能

摘要

背景与目的:笔者前期研究发现,长链非编码RNA Fox P4-AS1 (lnc RNA Fox P4-AS1)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中异常表达,其低表达是PTC区域淋巴结转移的独立危险因素,但其功能及作用机制尚不清楚。因此,本研究探讨lnc RNA Fox P4-AS1在PTC细胞中的表达,初步分析其对PTC细胞生物学行为的影响。方法:用q RT-PCR检测PTC细胞系(TPC-1、K1细胞)和正常甲状腺滤泡上皮细胞(Nthy-ori3-1细胞)中lnc RNA Fox P4-AS1的表达;将TPC-1、K1细胞分别转染Fox P4-AS1过表达慢病毒载体和空载病毒载体(阴性对照)后,并分别用CCK-8实验、克隆形成实验、Ed U、Transwell实验、流式细胞术分析细胞生物学功能的变化;通过GEPIA数据库和Lnc Tar网站预测Fox P4-AS1的靶基因,并用Western blot进行验证。用以上转染后的细胞构建小鼠皮下移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况,免疫组化检测瘤组织Ki-67的表达。通过KEGG数据库初步分析Fox P4-AS1可能影响的信号通路。结果:q RT-PCR结果显示,与正常甲状腺滤泡上皮细胞比较,lnc RNA Fox P4-AS1在两种PTC细胞中的表达水平均明显降低(均P<0.05)。细胞功能实验显示,转染Fox P4-AS1过表达慢病毒载体的TPC-1、K1细胞增殖活力明显减弱、侵袭和迁移能力均较阴性对照组细胞明显降低,且细胞周期阻滞在G0/G1期(均P<0.01)。GEPIA数据库和Lnc Tar网站预测Fox P4-AS1与CDK4存在潜在的相互作用靶点,Western blot结果显示,转染Fox P4-AS1过表达慢病毒载体两种细胞的CDK4/cyclin D1表达水平较各自阴性对照组细胞明显降低(均P<0.05)。皮下移植瘤实验结果显示,转染Fox P4-AS1过表达慢病毒载体的PTC细胞较转染空载病毒载体的PTC细胞在小鼠体内生长慢,形成的瘤体小,且瘤组织中Ki-67表达减少。KEGG通路富集分析显示,Fox P4-AS1低表达主要富集于PI3K-Akt-m TOR通路、细胞周期、细胞凋亡、免疫调节相互作用,Fox P4-AS1高表达主要富集于DNA甲基化、氧化应激通路等。结论:lnc RNA Fox P4-AS1在PTC细胞中表达下调,且与PTC细胞的恶性生物学行为密切相关,Fox P4-AS1可能通过抑制CDK4/cyclin D1表达抑制PTC细胞增殖,作为保护性因素发挥作用。