石榴对香豆酸-3-羟基化酶C3H基因的克隆和表达分析

摘要

对香豆酸-3-羟基化酶(coumarate-3-hydroxylase,C3H)是木质素合成途径的关键酶。本研究采用RACE方法从‘突尼斯软籽’(Punica granatum cv.Tunisiruanzi)中获得C3H的同源基因PgC3H。该基因开放阅读框为1527bp,编码508个氨基酸。相对分子量为57759.0,等电点为8.37,推测该蛋白定位于叶绿体中。系统进化树分析显示,PgC3H与其他物种起源相同,而与寇阿相思树AkF5H的亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明:PgC3H在花、嫩茎、种皮、叶片四个组织中均有表达,其中嫩茎中的表达量最高,而花中的表达量最低;PgC3H基因在‘突尼斯软籽’籽粒不同发育时期均有表达,呈现先降低、再升高再降低的趋势。30~60d相对表达量逐步下降,后在第75天时表达量升至最高,第90天时急剧下降至最低值,至第120天时维持较低水平表达。该研究对于后续研究PgC3H的功能提供了理论依据。