检测单纯疱疹病毒2型的实时荧光定量聚合酶链反应方法的建立

摘要

目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法,检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)。方法根据基因库信息,以HSV-2的gG基因区为靶基因,设计合成引物和荧光探针。采用重组质粒构建标准品,优化反应体系进行方法学评价,同时对350例临床诊断HSV-2感染者和50例健康体检者的分泌物进行检测。结果成功建立了TaqMan技术的real-time PCR方法。通过反应体系优化重复性良好,批内变异系数CV=2.56%,批间CV=5.15%。特异性高,对乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒及解脲支原体、沙眼衣原体阳性标本进行检测无特异性扩增,灵敏度达到500拷贝。从350例临床诊断HSV-2感染者的分泌物中,检出HSV-2DNA 288例,检出率82.29%;50例健康体检者分泌物中未检出HSV-2DNA。结论 real-time PCR方法能够快速、准确地检出HSV-2DNA,其特异性强、灵敏度高,可用于临床诊断HSV-2感染。