活血荣络方对Aβ_(25-35)损伤神经胶质细胞Wnt5α、Fz5、CaMKⅡ表达的影响

摘要

目的：旨在通过细胞实验,从Wnt5a-Fz5-Ca MKⅡ通路揭示活血荣络方治疗阿尔茨海默病（AD）的分子机制,为中医药治疗阿尔茨海默病提供新思路、新方法。方法：分别将Aβ25-35损伤星形胶质细胞铺板,以（2.53）×104/孔的密度接种到96孔板中,并随机分为6组,分别为2倍活血荣络方组、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组、s FRP组、空白组;待细胞的融合率为85%90%时,含药组分别给予相应的含药血清,s FRP组给予s FRP,空白组予以空白血清。取生长对数期细胞加相应刺激分别处理12、24、48、72 h。分别取细胞上清液分离细胞,用MTT法检测细胞毒力,用流式细胞术检测细胞凋亡;用化学免疫法检测Wnt5、Fz5、Ca MKⅡ的含量。结果：各组OD值随着时间的延长而增高,2倍活血荣络方组72 h OD值明显高于12 h（P〈0.05）,而空白组、s PRF组、2倍、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异（P〉0.05）;各给药组细胞活性均高于空白组（P〈0.05）,其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞活性低于空白组（P〈0.05）。各组细胞凋亡数目随着时间的延长而增高,其中空白组72 h细胞凋亡比例高于12 h（P〈0.05）,s PRF组72 h细胞凋亡比例明显高于12 h;2倍、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异（P〉0.05）;各给药组细胞凋亡比例明显低于空白组及s PRF组,其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞凋亡比例高于空白组（P〈0.05）。各给药组Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达均高于空白组（P〈0.05）,其中2倍活血荣络方组Wnt5α表达明显高于空白组（P〈0.01）,空白组明显高于s PRF组（P〈0.05）;其它给药组间比较：2倍活血荣络方组明显高于1倍活血荣络方组、多奈哌齐组及0.5倍活血荣络方组（P〈0.01）,1倍活血荣络方组与多奈哌齐组Wnt5α表达程度无明显差异（P〉0.05）,此两组Wnt5α表达均高于0.5倍活血荣络方组（P〈0.05）。结论：活血荣络方能有效提高Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达,减轻神经毒性的积累及细胞凋亡反应的发生,保护神经胶质细胞,延缓AD发病进展,其中以2倍活血荣络方效果最佳。