RNAi干扰大鼠VSMCs钟基因Per2对Dbp及AT_1受体基因表达的影响

摘要

目的应用RNAi技术干扰大鼠A7r5血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Per2基因并检测VSMCs时钟基因Bmal1、输出基因Dbp及AT1受体基因(AGTR1)m RNA表达的变化,初步探讨时钟基因、输出基因及AGTR1间的相关性。方法应用已筛选携带大鼠Per2基因干扰序列的慢病毒载体转染大鼠血管平滑肌A7r5细胞,通过RT-PCR方法检测时钟基因Per2及Bmal1、钟控基因Dbp和AGTR1 m RNA水平及节律变化。结果慢病毒载体转染A7r5细胞后,RT-PCR方法检测钟基因Per2的m RNA峰值时相后移,表达节律异常;钟基因Bmal1的m RNA表达峰值增强,表达节律未受影响;下游输出基因Dbp的m RNA表达明显受抑,表达节律异常;AGTR1的m RNA表达后期明显下降,提示其变化延迟于Per2变化。结论通过RNAi技术沉默大鼠血管平滑肌细胞中时钟基因Per2表达,使钟基因Bmal1反向增强,明显抑制输出基因Dbp的表达,影响其节律,可能造成AGTR1的异常延后表达。