锰对下丘脑GT1-7神经细胞氧化应激与凋亡的影响

摘要

目的建立锰(Mn)致下丘脑GT1-7神经细胞毒作用研究的体外模型,探讨Mn对下丘脑神经细胞氧化应激与凋亡的影响。方法取对数生长期GT1-7细胞分别经:(1)0、50、100、300和500μmol/L MnCl_(2)作用3、6、12、24和48 h;(2)经100μmol/L抗氧化剂(NAC)或等体积的1%DMSO预处理1 h后,再经0、50和300μmol/L MnCl_(2)处理12 h。然后,收集细胞和培养基,分别采用噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒法测定细胞的存活率和LDH释放量;(3)经0、50、100、300和500μmol/L MnCl_(2)作用1、3、6和12 h;(4)经100μmol/L NAC或等体积的1%DMSO预处理1 h后,再经0、50和300μmol/L MnCl_(2)处理1、3、6和12 h。处理结束后,测定细胞内ROS水平。结果经染Mn 3 h后,100、300和500μmol/L MnCl_(2)处理组GT1-7细胞存活率比对照组低;经染Mn 6、12、24和48 h后,Mn浓度达到50μmol/L即可使GT1-7细胞存活率降低(P<0.05)。染Mn 12和24 h时,与对照组比较,100、300和500μmol/L MnCl_(2)处理组GT1-7细胞培养液LDH活性升高(P<0.05)。染MnCl_(2)48 h时,与对照组比较,染Mn浓度达到50μmol/L可使GT1-7细胞LDH释放量升高(P<0.05)。染MnCl_(2)3 h及以上时,50、300和500μmol/L MnCl_(2)处理组GT1-7细胞产生活性氧(ROS)比对照组高(P<0.05);NAC预处理对Mn致GT1-7细胞存活率下降、LDH释放和ROS含量升高有拮抗作用。结论过量Mn暴露可使下丘脑GT1-7神经细胞ROS升高,并使LDH释放量升高和存活率降低,NAC对上述损伤有一定的拮抗效应,提示氧化应激可能是Mn致下丘脑神经细胞损伤的毒作用机制之一。