非梗阻性无精子症和健康生育男性精浆差异蛋白质的“shotgun”鉴定

摘要

目的:利用"shotgun"蛋白质组学策略鉴定正常生育男性和非梗阻性无精子症男性精浆的差异蛋白质。方法:正常生育男性和非梗阻性无精子症男性各3例自愿捐献的精液标本,通过Percoll分离获取精浆,等量混合后在SDS-PAGE上进行分离,切胶取条带进行胶内酶解,抽提肽段后利用"shotgun"蛋白质组学策略鉴定蛋白质。然后,将两组鉴定到的惟一肽段数≥2和惟一肽段数=1,但肽段总数≥4的蛋白质对比分析。结果:正常生育男性和非梗阻性无精子症男性精浆中共得到213个差异蛋白质,其中133个蛋白质存在于非梗阻性无精子症者,80个蛋白质存在于正常生育者。这些差异蛋白质集中在信号转导、细胞骨架和酶催化活性类,其中酶催化活性类中尤以氧化还原酶类为多。通过进一步分析,有18个差异蛋白质尤其值得关注,这18个蛋白质中包括:胞质动力蛋白重链、脂肪酸合成酶、微管蛋白α6等。结论:本研究中鉴定到的二者的差异蛋白质数量多、功能分布广,不仅再次证明"shotgun"蛋白质组学策略是鉴定蛋白质的一个较好的方法,也提醒我们:非梗阻性无精子症的发生原因复杂,类型多样,选择标本必须从组织学和基因水平严格细化,方能得到蛋白质研究的可信结果。本研究选取的无精子症男性精浆标本从蛋白质水平上表明其病因与有丝分裂M期有关,具体机制尚不清楚。