温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎小鼠滑膜增殖、凋亡及Hotair/Wnt1/β-catenin通路的影响

摘要

目的以胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠为实验对象进行体内实验,从Hotair/Wnt1/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的角度,分析温化蠲痹方(WHJBD)对类风湿关节炎(RA)的干预机制。方法选用雄性DBA/1J小鼠建立CIA模型,将造模成功小鼠按随机数字表法分为4组:模型组(CIA组)、温化蠲痹方组(WHJBD组)、甲氨蝶呤组(MTX组)、WHJBD+MTX组,每组6只。并随机选取同一批次的正常小鼠6只作为正常组。WHJBD组每天予WHJBD灌胃(25.78 g/kg)、MTX组每周予MTX灌胃(1.288 mg/kg)、WHJBD+MTX组同时予WHJBD及MTX灌胃,正常组及CIA组予同等剂量生理盐水灌胃,均持续4周。采用游标卡尺测量足掌和踝关节的肿胀程度并计算关节肿胀度,实时荧光定量PCR法检测各组Hotair、Wnt抑制因子1(WIF1)、C-myc、G1/S-特异性周期蛋白(CyclinD1)表达水平,免疫组化法检测Wnt1、β-catenin、肿瘤增殖抗原抗体(Ki-67)、Caspase3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果与CIA组比较,WHJBD、MTX、WHJBD+MTX组干预后小鼠关节肿胀度随着干预时间的增加逐渐降低;增殖相关蛋白Ki-67表达减少,凋亡相关蛋白Caspasse3、Bax表达增加,Bcl2表达减少;Hotair、WIF1基因表达增加,C-myc、CyclinD1基因表达减少;通路蛋白Wnt1、β-catenin表达减少;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论WHJBD具有减轻CIA小鼠足掌和踝关节肿胀度和关节炎程度,调节Hotair/Wnt1/β-catenin通路和滑膜组织的增殖、凋亡,发挥治疗CIA小鼠作用。