应用SYBR Green Ⅰ荧光PCR方法快速检测溶藻弧菌

摘要

目的利用SYBR Green I荧光PCR反应方法建立一种准确、快速、便捷检测溶藻弧菌的方法。方法根据溶藻弧菌toxR基因保守区域设计引物,建立检测溶藻弧菌SYBR Green I荧光PCR检测方法,利用8株溶藻分离株以及26株其他种属细菌进行特异性和灵敏度评价。利用含不同溶藻弧菌基因组拷贝数(自2×106拷贝/μl至2×100拷贝/μl)的样品进行灵敏度评价。同时,对平行样品分别应用普通PCR法和TaqMan探针实时PCR法进行检测,并对3种检测方法的特异度及灵敏度进行比较。结果基于toxR基因的SYBR Green I荧光PCR检测对全部8株溶藻弧菌检测为阳性,检测下限为2×101拷贝/μl,而26株其他种属细菌均为阴性。与普通PCR法和TaqMan探针实时PCR法比较,SYBR Green I荧光PCR检测方法灵敏度更高。结论用toxR基因作为靶基因检测溶藻弧菌的单重SYBR Green I荧光PCR检测方法,提升了检测速度,有良好的实际应用前景。