艾灸“天枢”穴对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织铁死亡及氧化损伤的影响

摘要

目的 探讨艾灸天枢穴治疗溃疡性结肠炎(UC)的可能作用机制。方法 将42只SD大鼠随机分为正常组9只和造模组33只。造模组采用自由饮用3.5%葡聚糖硫酸钠盐(DSS)溶液7天制备UC大鼠模型。32只造模成功,将其随机分为模型组、艾灸组、铁死亡抑制剂组、溶媒对照组,每组8只。正常组和模型组只做与干预组相同的抓取固定;艾灸组取“天枢穴”(双侧)进行温和灸,每次每穴10 min;铁死亡抑制剂组采用浓度为6 mg/ml的铁死亡抑制剂利普司他丁-1 (Liproxstatin-1)以10 mg/kg腹腔注射;溶媒对照组给予5%二甲基亚砜(DMSO) 1.67 ml/kg腹腔注射。各组均每日1次,连续8天。干预后进行结肠大体形态损伤指数(CMDI)评分,HE染色观察大鼠结肠组织形态结构变化,酶联免疫吸附测定法检测血清二胺氧化酶(DAO)表达,微板法检测血清D-乳酸(D-LA)含量,TUNEL染色观察结肠细胞死亡情况,免疫荧光法检测结肠组织活性氧(ROS)表达,比色法检测结肠铁离子的含量,免疫组织化学法检测结肠谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)表达。结果 与正常组比较,模型组与溶媒对照组大鼠结肠结构破坏严重,CMDI评分升高(P<0.01),HE染色可见浅表性溃疡,黏膜层破坏明显,黏膜下层大量炎性细胞浸润和水肿,结肠细胞死亡数增多,血清DAO、D-LA及结肠组织铁离子、ROS含量均增多,结肠组织GPX4蛋白表达减少(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,艾灸组、铁死亡抑制剂组大鼠结肠黏膜、腺体有不同程度修复,肠道炎症减轻,细胞死亡数显著减少,CMDI评分明显降低,血清DAO、D-LA及结肠组织ROS、铁离子含量均明显减少,结肠组织GPX4蛋白表达增多(P<0.05或P<0.01)。结论 艾灸“天枢穴”能降低结肠组织铁离子和ROS含量,上调GPX4蛋白表达,抑制铁死亡,可能是其促进UC结肠黏膜愈合、治疗UC的作用机制之一。