基于中和表位的GⅡ.4型重组诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒抗原含量检测方法的建立及验证

摘要

目的建立基于中和表位的GⅡ.4型重组诺如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗原含量检测方法,并进行验证,以用于重组NoV疫苗质量控制。方法应用ELISA和HBGA-VLP阻断试验筛选中和性单克隆抗体,并筛选配对抗体,分别作为包被抗体和检测抗体,建立GⅡ.4型重组NoV VP1蛋白VLP双抗夹心ELISA抗原定量检测方法。确定方法的线性检测范围,并对方法的专属性、准确性和精密性进行验证。结果27株GⅡ.4 VLP特异性ELISA检测阳性的杂交瘤细胞克隆中,有12株GⅡ.4型阻断抗体检测呈阳性,选择具有GⅡ.4型阻断活性的特异性单抗2H7-C5和2E6-B3作为双抗夹心抗体对,用于建立GⅡ.4型重组NoV VP1蛋白VLP双抗夹心ELISA抗原定量检测方法。该方法的线性测定范围为15.63~250 ng/mL,标准曲线R2均>0.98;准确性验证的加标回收率在72.23%~134.03%之间;重复性验证的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为7.06%,中间精密性验证的RSD分别为8.04%和9.14%。结论建立了基于中和表位的GⅡ.4型重组NoV VP1蛋白VLP抗原含量检测方法,该方法专属性、准确性、精密性良好,可用于GⅡ.4型重组NoV VP1蛋白VLP定量检测,为GⅡ.4抗原相关疫苗研发中质量控制和检定提供了技术支持。