人IL-6重组蛋白及IL-6荧光免疫层析检测试剂卡的研制

摘要

研制一种人IL-6荧光免疫层析检测试剂卡,用于IL-6分子的临床快速检测,并且研制一种重组表达人IL-6蛋白作为IL-6检测试剂卡的标准品。首先获得人IL-6基因序列,经密码子优化后连接到表达载体pET30a,然后转化到大肠杆菌BL21感受态细胞诱导表达。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside, IPTG)诱导后,得到可溶性表达的IL-6蛋白。经镍柱亲和层析纯化和超滤,得到重组人IL-6蛋白。基于荧光免疫层析技术及双抗体夹心法原理,应用时间分辨荧光微球制备IL-6荧光免疫层析检测试剂卡。经性能评估,试剂卡的空白限为5.2 pg/mL,变异系数在7.34%~11.11%之间,重复性较好;回收率在96.3%~107.2%之间;试剂卡37℃放置6周稳定性较好,与常见竞争物无交叉反应,参考值范围0~9.0 pg/mL;与电化学发光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA)比较临床样本检测结果相关性较好,相关系数r值为0.965。综上,研制的IL-6重组蛋白具有较高的纯度及浓度,可作为试剂盒检测的标准品;制备的IL-6定量检测试剂卡性能可满足临床应用的需求,且具有简便、快捷等优点。