ISO-1对人脐静脉内皮细胞Toll样受体4活性的调节及意义

摘要

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)特异抑制剂ISO-1[(S,R)-3-(4-羟苯基)-4,5-二氢-5-异噁唑乙酸,甲酯]是否通过Toll样受体4(TLR4)途径影响人脐静脉内皮细胞(HUVEC)活性,从而为ISO-1用于TLR4相关疾病的靶向治疗奠定基础。方法将传代培养的HUVEC分为脂多糖(LPS)组、ISO-1预处理组、LPS+ISO-1组和培养液对照组,通过RT-PCR、免疫荧光染色、放射免疫分析和化学反应法,检测ISO-1对HUVEC TLR4表达和肿瘤坏死因子α(TNFα)、一氧化氮合酶(NOS)产生的影响。结果高浓度ISO-1预处理HUVEC,可明显抑制TLR4mRNA表达,其中以25和50μmol/L浓度组最为明显(P<0.05);用50μmol/L ISO-1分别预处理HUVEC0.5、1、2、3h,均能明显降低TLR4mRNA表达,其中1h组的作用最为明显(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,HUVEC可表达低水平TLR4,LPS(10ng/mL)可促进TLR4表达,而50μmol/L的ISO-1预处理1h,可明显降低TLR4表达和LPS诱导的HUVEC TNFα分泌和NOS的产生(P<0.05)。ISO-1预处理对HUVEC产生TNFα和NOS的抑制呈现浓度依赖性。ISO-1作用时间短暂,预处理1h组的作用效果最好(P<0.05),此后逐渐减弱。结论 ISO-1可通过下调TLR4影响HUVEC功能,该结果可为ISO-1用于动脉粥样硬化和炎症等TLR4相关疾病的治疗提供实验依据。