知柏地黄汤对解脲脲原体感染模型大鼠精子线粒体通透性转化的影响

摘要

目的:观察知柏地黄汤对解脲脲原体(UU)感染模型大鼠精子线粒体通透性转化的影响。方法:取SPF级SD雄性大鼠90只,随机分成正常对照组、模型组、中药组(知柏地黄汤)、西药组(强力霉素)、中西组(知柏地黄汤+强力霉素),除正常对照组外,其他组均采用经大鼠膀胱注射UU建立UU感染动物模型。造模成功后,给予对应药物连续灌胃21 d,末次给药24 h后取标本,采用RT-PCR法测定大鼠精子线粒体VDAC_2m RNA、ANT_4m RNA表达水平,采用Western印迹法检测大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平,采用高效液相色谱法检测精子线粒体ATP、ADP、AMP含量。结果:正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠精子VDAC_2蛋白表达水平分别为0.626±0.074、0.039±0.011、0.101±0.037、0.236±0.070、0.475±0.064;ANT_4蛋白表达水平分别为0.527±0.096、0.044±0.011、0.127±0.040、0.253±0.054、0.367±0.086;模型组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.05,P<0.01);西药组、中西组较模型组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平显著升高(P<0.01);西药组、中西组较中药组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平上升显著(P<0.05,P<0.01);中西组较西药组线粒体VDAC_2蛋白表达水平上升显著(P<0.01)。正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠精子VDAC_2m RNA表达水平分别为0.008±0.001 035、0.000 79±0.000 226、0.002 06±0.000 861、0.003 34±0.000 229、0.004 85±0.000 495;ANT_4m RNA表达水平分别为0.026 50±0.003 401、0.001 64±0.000 205、0.005 04±0.002 537、0.008 57±0.000 690、0.013 13±0.000 826;模型组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4m RNA表达水平明显低于正常对照组(P<0.05,P<0.01);治疗组(中药组、西药组、中西组)大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4m RNA表达水平较模型组显著升高(P<0.01);西药组、中西组较中药组大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4m RNA表达水平显著上升(P<0.01);中西组较西药组大鼠精子VDAC_2、ANT_4m RNA表达水平显著上升(P<0.01)。正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠精子ATP值分别为(203.41±13.16)、(96.22±12.55)、(101.99±5.97)、(159.44±33.16)、(194.07±9.36)mg/L;ADP值分别为(129.87±14.68)、(99.87±3.28)、(104.99±16.40)、(118.51±12.99)、(121.62±9.41)mg/L;AMP值分别为(149.05±5.65)、(212.53±19.43)、(183.97±12.43)、(160.64±14.19)、(150.21±12.87)mg/L;EC值分别为0.56±0.01、0.36±0.03、0.40±0.01、0.50±0.06、0.55±0.01;与正常对照组比较,模型组大鼠精子ATP及EC值降低,AMP值上升,差异有显著性(P<0.01)。与模型对照组比较,西药组、中西组大鼠精子ATP及EC值上升,AMP值下降,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。与中西组比较,中药组大鼠精子ATP及EC值下降,AMP值上升,西药组大鼠精子ATP、EC值下降,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:UU感染能使大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平下降,VDAC_2m RNA、ANT_4m RNA表达水平降低,使ANT/VDAC的转运异常,进而使线粒体能量代谢异常,ATP、ATP/ADP及EC值下降。知柏地黄汤能够使UU感染大鼠精子线粒体VDAC_2、ANT_4蛋白表达水平上升,VDAC_2m RNA、ANT_4m RNA表达水平升高,调控ANT/VDAC蛋白复合体的转运功能,保证了ATP、ADP在线粒体与胞质间的有效转运,提升ATP、ATP/ADP及EC值,维护了大鼠精子线粒体正常的能量代谢。这可能是知柏地黄汤治疗UU感染性不育症的机制之一。