菟丝子含药血清对大鼠肢芽细胞、骨形成蛋白2及Ⅱ型胶原表达的影响

摘要

目的探讨菟丝子含药血清对SD大鼠胚胎肢芽细胞增殖与分化、细胞中骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备高、中、低剂量(40、20、10 g/kg)菟丝子含药血清和正常血清。取E15后肢芽制成细胞悬液,接种到细胞培养板中,分别加入高、中、低剂量菟丝子含药血清和正常血清,作为高、中、低剂量组和阴性对照组。体外培养72 h,MTT法检测肢芽细胞的增殖,阿利新蓝染色检测肢芽细胞的分化,RT-PCR法检测肢芽细胞中BMP-2、Ⅱ型胶原mRNA的表达,Western blotting检测Ⅱ型胶原蛋白的表达。结果低、中剂量组细胞增殖较快,吸光度值高于阴性对照组(P<0.05);中剂量组软骨细胞集落数多于阴性对照组(P<0.05),高剂量组软骨细胞集落数低于阴性对照组(P<0.05);低、中剂量组BMP-2 mRNA表达水平高于阴性对照组(P<0.05),高剂量组BMP-2 mRNA低于阴性对照组(P<0.05);各剂量组Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达水平均高于阴性对照组(P<0.05)。结论不同剂量菟丝子含药血清均可促进肢芽细胞的增殖和Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达;高剂量菟丝子含药血清可下调BMP-2 mRNA的表达水平,抑制肢芽细胞的分化。