启膈散与顺铂对食管癌细胞EC9706低氧下生长抑制及其miR-21,PDCD4和PTEN表达的影响

摘要

目的:观察低氧下启膈散和顺铂抑制食管癌细胞增殖的协同效应,从miR-21及其靶基因角度探讨其机制。方法:制备含药血清,噻唑蓝(MTT)比色法检测启膈散和顺铂单用或联合应用对食管癌细胞EC9706增殖的影响,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测启膈散和顺铂单用或两者联合应用对食管癌细胞miR-21,程序死亡蛋白4(PDCD4),磷酸酶和张力蛋白类似物(PTEN)mRNA表达的影响,免疫印迹法(Western blot)检测PDCD4,PTEN蛋白表达。结果:启膈散在浓度为8%,10%与1 mg·L-1顺铂合用具有协同作用,其两药相互作用系数(CDI)分别为0.90,0.94。顺铂高浓度组,联合高、低浓度组miRNA-21表达量明显低于空白组(P<0.05);联合高、低浓度组miRNA-21表达量显著低于同浓度顺铂组(P<0.01),且联合高浓度组低于联合低浓度组(P<0.05)。顺铂高浓度、启膈散组PDCD4 mRNA表达量明显低于空白组(P<0.05),而联合高、低浓度组PDCD4,PTEN mRNA表达量明显高于空白组(P<0.05);联合高、低浓度组PDCD4,PTEN mRNA明显高于同浓度顺铂组(P<0.01),且联合高浓度组PTEN mRNA表达高于联合低浓度组(P<0.01)。与空白组比较,联合高、低浓度组PTEN蛋白表达明显升高(P<0.05),且联合高、低浓度组PTEN蛋白显著高于同浓度顺铂组(P<0.01);顺铂高、低浓度组,联合高、低浓度组PDCD4明显高于空白组(P<0.05),联合高浓度组明显高于同浓度顺铂组和联合低浓度组(P<0.05,P<0.01)。结论:启膈散含药血清和顺铂在抑制食管癌细胞EC9706增殖方面具有协同作用,其机制可能与通过抑制miR-21表达从而升高PDCD4和PTEN基因表达相关。