基于芯片式数字PCR技术的乙型肝炎病毒绝对定量检测方法的建立及应用

摘要

目的建立芯片式数字PCR技术用于乙型肝炎病毒的绝对定量检测,并对此方法的灵敏度、检出限、检测范围开展评估。方法本研究设计了芯片式数字PCR用于乙型肝炎病毒绝对定量检测的引物探针,并对扩增条件、反应的体系进行了优化,采用阴性对照法和稀释法对检出限、检测范围和检测方法的重复性进行评估。同时与实时荧光定量PCR的结果作了平行比较。结果芯片式数字PCR检出限为3.94×10~4copies/ml,检测范围是3.94×10~4copies/ml^2.82×10~7copies/ml,重复性的相对标准偏差(RSD)为2.89%~13.37%。相比较实时荧光定量PCR,对样本的浓度要求苛刻,高稀释倍数与阴性对照均出现阳性。结论本研究建立了芯片式数字PCR技术用于乙型肝炎病毒的绝对定量方法,不必依赖对照品或标准品,可高度耐受PCR反应抑制剂,为乙型肝炎病毒载量的测定提供了一种新的检测手段。