一种改良的云杉针叶总RNA提取方法

摘要

云杉(Picea)是一种重要的绿化和用材树种。根据云杉的特点,本研究提出了改良的云杉RNA提取方法即SDS酚-LiCl法,以不同种云杉(青杄,白杄和红皮)的针叶为试验材料,采用TRIzol法、CTAB法、改进的SDS酚法和SDS酚-LiCl法提取RNA,并进行了质量验证。结果表明:TRIzol法不能提取云杉针叶总RNA;CTAB法和改进的SDS酚法提取的RNA质量少,并存在不同程度的多糖、多酚和DNA污染。SDS酚-LiCl法适当增加了提取液中SDS、PVP以及β-巯基乙醇的浓度,结合酸性条件、高盐溶液(3 mol/L NaAc)和LiCl等减少DNA、多糖污染的步骤,最终提取的RNA质量好、得率高。进一步反转录后,利用特异引物进行扩增验证,发现扩增的片段条带清晰,得率高,片段大小符合预期。研究结果表明,SDS酚-LiCl法可以较好的提取云杉RNA并进行后续的基因表达及转录组研究,为推动云杉在转录水平上的研究奠定了基础。