重组人GST-TCF4βBD在大肠杆菌中的表达条件优化与活性鉴定

摘要

在大肠杆菌中优化重组人GST-TCF4 βBD(recombinant human GST-TCF4 β-catenin binding domain,rhGST-TCF4 βBD)的表达条件及其生物学活性初探。化学合成的人TCF4βBD基因片段与pGEX-6P-1表达载体连接,构建重组质粒,再将其转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞中诱导目的蛋白质表达。通过优化诱导时间、诱导温度和IPTG浓度,确定rhGST-TCF4βBD可溶表达的最佳条件。以GSTrap^TM亲和柱分离纯化rhGST-TCF4 βBD后,再以GST Pull-down实验进行生物学活性鉴定。SDS-PAGE结果表明,在大肠杆菌中成功进行了rhGST-TCF4βBD的可溶表达,确定诱导温度25℃、诱导时间8 h和0.2 mmol/L IPTG作为rhGST-TCF4 βBD可溶表达的最佳表达条件,此时表达量达24%,趋于表达量峰值。GST Pull-down实验结果表明,纯化的rhGST-TCF4 βBD能与重组人β-catenin和细胞内源β-catenin特异性结合,具有良好的生物学活性。本文成功进行了rhGST-TCF4 βBD在大肠杆菌中的表达条件优化与活性鉴定,为靶向β-catenin/TCF4相互作用小分子抑制剂筛选模型的建立奠定了实验基础。