二重荧光RT-LAMP对牛病毒性腹泻病毒和牛轮状病毒的鉴别诊断

摘要

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛轮状病毒(BRV)是2种引起牛病毒性腹泻症的主要病原体,且经常混合感染,难以区分。本研究旨在建立一种可视化二重荧光RT-LAMP方法用于BVDV和BRV的鉴别诊断。根据GenBank中BVDV的5′端非编码区和BRV的VP6基因保守序列,设计了2套特异性引物,在每条内引物的5′端标记不同荧光基团,经过反应条件优化,特异性、灵敏度和干扰性试验评估后,建立了一种可凭肉眼读取结果的二重RT-LAMP检测方法。结果表明,该方法对BVDV和BRV有高度特异,与其他牛病原体无交叉反应,敏感性高,每个反应最低能检测100个BVDV RNA和100个BRV RNA;干扰性小,能同时检测2个不同浓度的模板组合。对144份样品的检测结果显示,BVDV感染率为18.1%,BRV感染率为7.6%,2种病毒混合感染率为1.4%;与荧光RT-PCR方法相比敏感性和特异性均为100.0%。结果显示,该二重RT-LAMP方法可鉴别诊断BVDV和BRV,具有特异、敏感、快速、稳定等优点,适用于流行病学调查和临床检测。