白芷细胞外ECBP21全长cDNA克隆

摘要

ECBP21是从白芷悬浮培养细胞外检测并纯化的一种依赖钙的钙调素结合蛋白.利用RT-PCR和5’-RACE方法,获得其CDNA全长.ECBP21 cDNA全长947 bp,编码216个氨基酸,其中N端1～25氨基酸为信号肽,26～216氨基酸为成熟蛋白肽段,而且26～45氨基酸序列与纯化ECBP21末端测序结果完全一致.将此cDNA成熟蛋白编码区核苷酸片段导入pET-28b（+）表达载体中,并在大肠杆菌表达系统中诱导表达,经CaM-Geloveriay检测证实表达蛋白具有Ca2+依赖的钙调素结合特性,从而进一步证实了cDNA克隆的正确性.这为进一步用分子生物学方法研究植物细胞外多肽ECBP21的生物学功能奠定了基础.