一种具厚几丁质外壳微小节肢动物无损伤凭证标本高质量DNA模板的获取方法

摘要

目的针对具厚几丁质外壳的微小节肢动物,研究一种无需研磨、不损坏凭证标本形态的高质量DNA模板的获取方法。方法以具有厚几丁质外壳的土壤甲螨为材料,用几丁质酶消化其外壳,然后利用裂解液对整个个体进行裂解,以DNA条形码片段的扩增结果作为判断模板质量的依据,探讨几丁质酶的最佳工作浓度和工作时间;比较几丁质酶处理前后标本的外部形态。结果该方法能获得高质量的DNA模板,在25℃,pH值6.0时,几丁质酶最佳浓度为1 mg/ml,最佳作用时间为24 h。经几丁质酶处理后,螨的外部形态保存完整,与处理前无明显差别,可以用于形态鉴定。结论该方法首次将几丁质酶消化动物几丁质外壳与提取模板DNA相结合,不仅能保证微小节肢动物的形态特征不被破坏,而且获取的DNA模板质量高,作为凭证标本的微小节肢动物可以制成玻片标本保存,保证了凭证标本的形态完整性。