RNA干扰大鼠H9c2心肌细胞Hsc70基因条件筛选

摘要

为了研究H9c2心肌细胞RNA干扰的转染条件,筛选结构型热休克蛋白70(Hsc70)干扰序列,采用流式细胞仪和Western blot方法,研究不同剂量比例荧光标记的siRNA(FAM-siRNA)和不同浓度脂质体2000(Lipofectamine 2000)对转染效率的影响,进一步筛选Hsc70 siRNA的最佳沉默序列。结果显示:流式细胞仪试验得出的最佳转染条件为80 nmol/L FAM-siRNA+1.5μL Lipofectamine 2000;Western blot结果表明,Oligo 2、Oligo 3和Oligo 4组中的Hsc70蛋白表达极显著降低(P<0.01),其中Oligo 3组的沉默效率最高;转染后48 h收获细胞为最佳转染时间。结果表明:80 nmol/L FAM-siRNA+1.5μL Lipofectamine 2000为最佳转染条件,以Oligo 3为最佳RNA干扰靶基因。