槲皮苷通过Nrf2/HO-1通路抑制H2O2诱导人肝细胞L-02凋亡和损伤

摘要

目的探讨槲皮苷对H2O2处理的人肝细胞L-02增殖、氧化应激、凋亡及炎性因子表达的影响及其作用机制。方法将L-02细胞分为空白组、H2O2组、槲皮苷(25、50、100、200、400、800、1600、3200 μmol·L-1)处理组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,酶联免疫(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、核转录因子E2相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果与空白组比较,H2O2诱导的L-02细胞存活率降低;与H2O2组比较,50~1600 μmol·L-1槲皮苷细胞存活率升高;与空白组比较,H2O2诱导的L-02细胞凋亡率,Bax、Cleaved caspase-3、Nrf2、HO-1蛋白表达量,ROS、MDA、TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量、SOD活性显著减少(P<0.05)。与H2O2组比较,100、200、400 μmol·L-1槲皮苷明显减少细胞凋亡,Nrf2、HO-1、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达量,ROS、MDA、TNF-α、IL-6水平,显著提高Bcl-2蛋白水平和SOD活性,均呈浓度依赖性(P<0.05)。结论槲皮苷提高H2O2处理的人肝细胞L-02存活率,并抑制其凋亡,机制可能与其抑制Nrf2/HO-1通路和降低氧化应激炎症反应有关。