模拟失重大鼠胸主动脉和腹主动脉溶酶体相关分子表达改变

摘要

目的研究四周尾部悬吊模拟失重大鼠胸主动脉(thoracic aorta, TA)和腹主动脉(abdominal aorta, AA)溶酶体相关分子的基因和蛋白表达改变。方法采用4周尾部悬吊大鼠模拟失重对心血管系统的影响,通过Western blot技术、免疫组织化学染色和实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测溶酶体相关膜蛋白1(lysosomal associated membrane protein 1, LAMP1),调控溶酶体合成的转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)、转录因子E3(transcription factor E3, TFE3)以及溶酶体相关基因包括LAMP1、酸性神经酰胺酶(N-acylsphingosine amidohydrolase 1, ASAH1)、液泡型ATP酶转运协助蛋白1(adenosine triphosphatase(ATPase)H+ transporting accessoryprotein 1, ATP6AP1)、液泡型ATP酶H亚基(AT Pase H+transporting V1 subunit H,ATP6V1H)以及粘脂蛋白1(mucolipin 1,MCOLN1)的蛋白表达、分布和m RNA水平变化。结果 Western blot显示,与对照(control, CTR)组相比,悬吊(hindlimb unloading tail suspension, HU)组大鼠TA和AA的LAMP1蛋白表达均显著降低(P<0.05)。免疫组化则显示LAMP1主要分布于TA和AA的内膜和中膜;CTR大鼠TA内膜、中膜的LAMP1蛋白表达均显著高于AA(P<0.05);与CTR组相比,HU组大鼠TA、AA内膜LAMP1表达无明显变化,但在TA中膜呈现均匀的表达降低,而在AA中膜则呈现不均匀的表达降低(P<0.05);qRT-PCR显示,与CTR组比较,溶酶体相关基因表达在HU组大鼠TA显著增加(P<0.05),但在AA则显著降低(P<0.05)。转录因子TFEB和TFE3呈现与溶酶体相关基因相同变化,蛋白表达在HU组大鼠TA和AA中均显著降低(P<0.05),但基因表达在TA增加,在AA降低(P<0.05)。结论 HU组大鼠TA和AA溶酶体相关蛋白表达均降低,但基因转录及转录因子表达呈现部位特异性改变,可能参与动脉重塑过程。