Sirt1通过HNF-1α/FXR-1通路调控脓毒症肝损伤的动物研究

摘要

目的:探讨沉默信息调节因子1(Sirtuin 1,Sirt1)在脓毒症肝损伤中的作用及机制。方法:采用腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)法构建脓毒症小鼠模型,并设置腹腔注射生理盐水小鼠作为对照组,用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)检测脓毒症小鼠模型的肝损伤情况,采用定量实时聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qrt-PCR)检测脓毒症小鼠及对照组小鼠肝组织中的Sirt1/肝细胞核因子-1α(hepatic nuclear factor-1α,HNF-1α)/法尼酯X受体1(farnesoid X receptor-1,FXR-1)通路表达情况。分离鉴定原代小鼠肝实质细胞,采用CCK8法检测不同质量浓度的LPS对小鼠肝实质细胞活力的影响;利用细胞增殖成像分析试剂盒(EdU法)检测不同质量浓度的LPS对小鼠肝实质细胞增殖能力的影响;应用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测不同质量浓度的LPS对小鼠肝实质细胞炎症因子[白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)/肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]分泌的影响。构建过表达Sirt1质粒,然后以Lipofectamine2000为载体,转染进细胞,48 h后采用qrt-PCR检测Sirt1/HNF-1α/FXR-1通路的表达情况,分别采用CCK8、EdU法以及ELISA法检测Sirt1对LPS在肝实质细胞中功能的影响。结果:与对照组相比,LPS诱导的脓毒症小鼠肝损伤样本中Sirt1/HNF-1α/FXR-1通路表达下调;LPS会降低小鼠肝实质细胞的活力,抑制肝实质细胞的增殖能力,并促进肝实质细胞中炎症因子IL-6及TNF-α的分泌。转染过表达Sirt1的肝实质细胞中,HNF-1α/FXR-1通路的表达上调,且能够抑制LPS引起的细胞活力及增殖降低以及炎症因子的分泌。结论:Sirt1/HNF-1α/FXR-1通路参与调控LPS诱导的脓毒症肝损伤,过表达Sirt1能够抑制LPS在肝实质细胞中的损伤效应。