双峰驼TLR7的原核表达及其多克隆抗体制备

摘要

Toll样受体7(TLR7)可介导机体抗病毒等免疫应答,是重要的胞内模式识别受体之一。为获取双峰驼TLR7多克隆抗体,从双峰驼TLR7序列(GenBank Accession:XM_010966214.1)选取编码区,经过跨膜结构与信号肽分析,取膜外序列构建重组质粒pET-28a-TLR7,并转化进感受态细胞BL21(DE3)中,对IPTG诱导表达的蛋白进行纯化及SDS-PAGE鉴定,将纯化蛋白免疫家兔,制备兔抗双峰驼重组TLR7多克隆抗体,并进行间接ELISA和Western blot检测分析。结果:诱导表达的重组双峰驼TLR7约为47 kDa,与预期大小一致,IPTG最佳诱导浓度为0.3 mol/L,最佳诱导时间为6 h,以包涵体形式表达;间接ELISA检测显示,制备的兔抗重组双峰驼TLR7多克隆抗体效价为1∶32 000,经Western blot鉴定可知抗体特异性良好;在成年双峰驼的空肠淋巴结中检测验证TLR7,根据SABC免疫组化试验得到该抗体的最佳工作浓度为1∶800,并通过光学显微镜观察到TLR7在淋巴结的副皮质区的树突状细胞中表达,证明本试验已制备出高效价和特异性较好的兔抗重组双峰驼TLR7的多克隆抗体。重组双峰驼TLR7的成功表达及其多克隆抗体的制备,为进一步研究双峰驼体液免疫及抗感染治疗奠定了基础。