黄鳝单条染色体的显微分离及特异性检测

摘要

建立了显微分离黄鳝单条染色体及检测其特异性的方法.在Olympus倒置显微镜下用毛细玻璃微针手工分离黄鳝减数分裂Ⅰ终变期3号染色体,将其DNA作模板进行DOP-PCR扩增后,分别以α-32P-dCTP和Biotin-11-dUTP标记的单条染色体DNA PCR扩增产物及Biotin-11-dUTP标记的大豆18S rRNA基因作探针进行Southern杂交、FISH和Dot杂交来检测其特异性.结果表明:(1)减数分裂Ⅰ终变期染色体标本是进行染色体显微操作的理想材料;(2)DOP-PCR扩增产物片段在200～1 000 bp之间,平均600 bp左右;(3)杂交结果显示,本研究所获得的单条染色体是黄鳝3号染色体;(4)与显微操作仪和微激光分离相比较,该方法不需要昂贵仪器,在常规实验室即可操作,具有广泛的普及应用意义.