一种鉴定小鼠胚胎质量的双重荧光染色方法

摘要

尝试改进并建立一种较可靠的、适合小鼠胚胎质量参考鉴定的双重荧光染色(细胞计数)方法。与传统方法相比,本实验中抗羊脾细胞抗血清的最佳稀释度为1∶5,作用时间为30min。豚鼠补体最佳稀释度为1∶5,两种分染染料H33342和PI的工作浓度均降低至5.3μg/ml便可着色,染色时间延长至90min,加大了染料工作液中柠檬酸钠的浓度,并在计数观察前增加压片这一步骤。染色过程中应注意避免血清物质对抗体补体的不良影响以及避光和快速的操作。双重荧光染色后小鼠胚胎内细胞团(ICM)细胞着色为蓝色,滋养层(TE)细胞着色为粉红色,数目清晰可辨。此方法可以作为一种简洁有效的小鼠胚胎质量鉴别参考方法。