心肌祖细胞中Tbx5启动子区的组蛋白乙酰化调控机制研究

摘要

目的研究心肌祖细胞中Tbx5启动子区p300和CBP介导的组蛋白乙酰化修饰对Tbx5表达的调控及其修饰位点,探讨Tbx5的组蛋白乙酰化修饰调控网络。方法体外培养胚胎心肌祖细胞,分为对照组、二甲基亚砜(DMSO)组和姜黄素组,对照组不给予额外干预,DMSO组给予DMSO干预,姜黄素组给予30 mmol/L姜黄素干预。同时,采用慢病毒载体转染胚胎心肌细胞48 h,分为对照组、GFP组和p300-RNAi组,对照组不转染,GFP组采用GFP慢病毒载体转染,p300-RNAi组采用p300-RNAi慢病毒载体转染。Western blot方法检测各组的组蛋白H3的乙酰化水平;实时荧光定量逆转录PCR检测各组Tbx5和p300 mRNA水平的表达;染色质免疫共沉淀(CHIP)-实时荧光定量逆转录PCR检测Tbx5启动子区组蛋白H3不同位点H3K4、H3K9和H3K27的乙酰化水平及Tbxt5启动子结合的p300和CBP水平。结果姜黄素组Tbx5 mRNA相对表达水平及H3ac水平较对照组和DMSO对照组明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与GFP组和对照组比较,p300-RNAi组H3ac、H3K4ac、H3K27ac水平降低,H3K9ac水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。p300、CBP均与Tbx5启动子区域相结合。与GFP组和对照组比较,p300-RNAi组p300结合水平降低,CBP结合水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Tbx5启动子区组蛋白乙酰化修饰受p300和CBP的双重调控,p300-RNAi介导的H3K4和H3K27低乙酰化对Tbx5表达的抑制作用,可被CBP介导的H3K9高乙酰化代偿,保证Tbx5的正确表达。