应用新型假包膜糖蛋白提高慢病毒感染人T细胞效率的研究

摘要

目的利用基因工程方法构建一种新型假包膜糖蛋白表达载体来提高慢病毒感染人T细胞的效率。方法采用分子克隆技术构建CD5-scFv-VSV-G质粒;慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装慢病毒并感染Jurkat细胞,流式细胞术检测转导率并计算其滴度;慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装慢病毒感染健康人T细胞获得嵌合抗原受体T细胞。结果与野生型WT VSV-G慢病毒比较,CD5-scFv-VSV-G慢病毒能够提高感染率1.5倍(10%的CD5-scFv-VSV-G慢病毒对Jurkat细胞的感染率为63.1%),而在293T细胞中,不同比例CD5-scFv-VSV-G慢病毒的感染率都低于野生型WT VSV-G慢病毒。当感染复数(MOI)=5时,与野生型WT VSV-G慢病毒比较,CD5-scFv-VSV-G慢病毒能够提高感染率1.6倍(33%的CD5-scFv-VSV-G慢病毒对CD3+T细胞的感染率为44.1%);当MOI=10时,与野生型WT VSV-G慢病毒比较,CD5-scFv-VSV-G慢病毒也能够提高感染率1.5倍(33%的CD5-scFv-VSV-G慢病毒对CD3+T细胞的感染率为78.8%)。结论该研究成功构建了一种新型假包膜糖蛋白表达载体,与野生型慢病毒WT VSV-G比较,新型假包膜糖蛋白包装的慢病毒可提高其转导人T细胞效率。